基于pJFH-1的HCV全基因组扩增方法的建立

目的基于pJFH-1建立能稳定扩增HCV全基因组的长链PCR方法。方法以pJFH-1为测试模板，通过优化PCR扩增中各个重要环节，包括引物的选择、甘油和/或DMSO最适浓度的筛选、循环条件的摸索等，建立能稳定扩增HCV全基因组的长链PCR方案。结果高Tm值（＞65℃）的引物更有利于HCV全基因组的扩增；5%、10%甘油或5%DMSO可显著提高PCR扩增的特异性和扩增效率，且甘油的促进作用优于DMSO；双温法较三温法能获得更高产量的PCR产物。结论通过优化长链PCR反应体系及条件，成功实现HCV基因全长的扩增。