E2-2基因腺病毒载体的构建及其对EPCs生长、增殖及ID1表达的影响

目的构建转录因子E2-2基因腺病毒载体，观测内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）过表达E2-2基因对DNA结合抑制因子-1（inhibitorofDNAbinding/differentiation,ID1）表达的影响。方法分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR法扩增E2-2基因CDs全长DNA，克隆入载体pTG19-T后，亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中，构建pAdTrack/E2-2重组载体,与pAdEasy-1骨架质粒同源重组形成重组病毒pAd/E2-2，经293细胞包装，获具高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。将该病毒感染EPCs，倒置显微镜观测经感染的EPCs的GFP表达情况。CCK-8（cellcountkit-8)法检测病毒pAd/E2-2对EPCs生长、增殖的影响。RT-PCR、Westernblot分别检测经感染的EPCs中E2-2与ID1基因及其编码蛋白的表达情况，并予以定量分析。结果分离、培养并鉴定到小鼠骨髓EPCs。克隆到2013bp的E2-2基因，并获得高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。CCK-8法检测表明，与对照比较，过表达E2-2的EPCs的生长、增殖速度减慢，48h开始变得尤为明显（P<0.01）；RT-PCR、Westernblot及定量分析结果显示，E2-2能下调ID1的表达，与对照比较，差异具统计学意义(P<0.01)。结论分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs，克隆出E2-2基因，证实E2-2能明显抑制EPCs的生长、增殖，并能下调ID1基因的表达。