%0 Journal Article %T E2-2基因腺病毒载体的构建及其对EPCs生长、增殖及ID1表达的影响 %A 刘晓丽 %A 杨海捷 %A 苏勇 %A 谭志胜 %A 朱琴 %A 王红 %J 第三军医大学学报 %P 1664-1669 %D 2014 %X 目的构建转录因子E2-2基因腺病毒载体,观测内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)过表达E2-2基因对DNA结合抑制因子-1(inhibitorofDNAbinding/differentiation,ID1)表达的影响。方法分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR法扩增E2-2基因CDs全长DNA,克隆入载体pTG19-T后,亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack/E2-2重组载体,与pAdEasy-1骨架质粒同源重组形成重组病毒pAd/E2-2,经293细胞包装,获具高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。将该病毒感染EPCs,倒置显微镜观测经感染的EPCs的GFP表达情况。CCK-8(cellcountkit-8)法检测病毒pAd/E2-2对EPCs生长、增殖的影响。RT-PCR、Westernblot分别检测经感染的EPCs中E2-2与ID1基因及其编码蛋白的表达情况,并予以定量分析。结果分离、培养并鉴定到小鼠骨髓EPCs。克隆到2013bp的E2-2基因,并获得高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。CCK-8法检测表明,与对照比较,过表达E2-2的EPCs的生长、增殖速度减慢,48h开始变得尤为明显(P<0.01);RT-PCR、Westernblot及定量分析结果显示,E2-2能下调ID1的表达,与对照比较,差异具统计学意义(P<0.01)。结论分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs,克隆出E2-2基因,证实E2-2能明显抑制EPCs的生长、增殖,并能下调ID1基因的表达。 %K EPCs %K E-基因 %K ID基因 %K 腺病毒 %U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201312251