赖氨酸490突变对OATP-C分子底物转运能力的影响

目的研究人肝脏特异的有机阴离子转运蛋白基因OATP-C蛋白分子膜外区保守的490位阳离子赖氨酸对其有机阴离子底物摄取能力的影响。方法从人肝脏mRNA中克隆OATP-C野生型基因全长cDNA序列，通过定点突变将高度保守的第490位赖氨酸残基突变为中性氨基酸-苏氨酸，构建其C端的GFP融合蛋白的真核表达载体，转染HEK293细胞，观察突变体的细胞膜定位能力和底物摄取功能的变化。结果OATP-C野生型及突变体均能定位表达于HEK293细胞质膜；[3H]硫酸盐雌酮底物摄取实验显示，突变体5min底物摄取量较野生型下降了38.66％，浓度依赖的[3H]硫酸盐雌酮底物摄取动力学分析表证明，突变体Km和Vmax分别明显增高和降低。结论OATP-C蛋白膜外区第490位赖氨酸是关键的功能氨基酸，是其重要的结构功能单位。