人HNF1α真核表达载体的构建及表达

目的构建人肝细胞核因子-1α（hepatocytenuclearfactor1α,HNF1α）真核表达载体，在体外表达并检测。方法提取HepG2总RNA，用RT-PCR方法制备HNF1αcDNA，进行T-A克隆。HindⅢ/EcoRⅠ双酶切测序正确的重组质粒，回收HNF1αcDNA片段，将其亚克隆于pcDNA3.1(+)载体的多克隆位点内。将构建好的真核表达质粒用脂质体法转染HepG2细胞，RT-PCR和免疫印迹法检测HNF1α的表达。结果正确构建了pcDNA3.1(+)-HNF1α重组载体，并且在转染该质粒的HepG2细胞中检测出了HNF1α的高表达。结论成功地构建了人HNF1α真核表达载体，其可以在体外表达。