质粒表达型siRNA对人近端肾小管上皮细胞cubilin表达的抑制作用

目的观察cubilinsiRNA真核表达载体对人近端肾小管上皮细胞（humanrenalproximaltubularepithelialcellline,HKC）cubilin基因的特异性抑制作用。方法针对人cubilin基因设计并构建siRNA真核表达载体pSUPEREGFP-C1和pSUPEREGFP-C2，转染HKC，经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测cubilinmRNA的表达、不同浓度的人血清白蛋白（HSA）刺激正常HKC及转染重组质粒的HKC24h后cubilinmRNA的表达,并通过激光共聚焦扫描荧光显微镜观察HKC对白蛋白摄取情况的变化。结果FQ-PCR显示HSA刺激正常HKC后cubilinmRNA表达具有剂量依赖性。与正常对照组相比，两个重组质粒均可部分抑制HKCcubilin表达，抑制效率分别为66％和37％，HSA刺激转染pSUPEREGFP-C1、pSUPEREGFP-C2的HKC后cubiinmRNA水平较正常对照组比较分别下降50％、34％，转染了重组质粒的HKC对白蛋白的摄取明显减少。结论成功地构建了针对人cubilin基因的RNA干扰真核表达载体，表达型siRNA可抑制肾小管上皮细胞cubilin基因的表达及对白蛋白的摄取。