全部 标题 作者
关键词 摘要

OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用:99美元

查看量下载量

相关文章

更多...

B7-H1慢病毒的制备及其在B16F10细胞中的表达鉴定

, PP. 24-27

Keywords: B-H,慢病毒,基因治疗

Full-Text   Cite this paper   Add to My Lib

Abstract:

目的构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞。方法以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致。将B7-H1表达载体用LipofectamineTM2000转染293FT细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染B16F10细胞后,加入含Blasticidin(终浓度为4.0μg/ml)的RPMI1640培养基,筛选出稳定表达B7-H1蛋白的B16F10细胞株。结果PCR扩增得到编码小鼠B7-H1的877bp基因片段,与预期大小一致。B7-H1重组慢病毒感染B16F10细胞后,用B7-H1单抗进行免疫组化检测,荧光显微镜观察显示B7-H1分子表达于B16F10细胞。FACS测定B16F10细胞荧光阳性率为36%。结论成功构建了B7-H1慢病毒表达载体,包装出感染性病毒颗粒,重组慢病毒感染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H1膜表面蛋白,为进一步研究B7-H1分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤免疫逃逸机制中的作用奠定了基础。

References

[1]  张立群, 段文元, 许雪青, 等. B7-H1慢病毒的制备及其在B16F10细胞中的表达鉴定[J]. 第三军医大学学报,2007,29(1):24-27.
[2]  陈柯宏,何江,王德林,等.慢病毒介导LATS1过表达对人肾癌细胞系786-0增殖、凋亡及下游癌基因YAP的影响[J].第三军医大学学报,2015,37(17):1727.  Chen Kehong,He Jiang,Wang Delin,et al.Lentivirus-mediated LATS1 overexpression suppresses proliferation, improves apoptosis and down-regulates downstream oncogene YAP in human renal cell carcinoma 786-0 cells[J].J Third Mil Med Univ,2015,37(01):1727. [2]刘云杰,袁月,童珂雅,等.以支架为载体的TRADD基因慢病毒转染对食管良性狭窄的抑制作用[J].第三军医大学学报,2015,37(18):1806.  Liu Yunjie,Yuan Yue,Tong Keya,et al.Inhibitory effect of TRADD gene-expressing lentivirus vector transfection with covered stent as carrier in canine benign esophageal stricture[J].J Third Mil Med Univ,2015,37(01):1806. [3]熊加祥,许雪青,白云,等.载体介导的siRNA抑制B7-H1在星形胶质细胞上的表达[J].第三军医大学学报,2006,28(04):298. [4]郭建新,李力,白?,等.慢病毒携带shRNA对宫颈癌细胞中HPV16型E6表达的抑制作用[J].第三军医大学学报,2006,28(11):1218. [5]庞浩,刘昌峨,刘勤,等.慢病毒介导的CYP3A11基因knock-down小鼠的建立[J].第三军医大学学报,2010,32(05):422.  Pang Hao,Liu Change,Liu Qin,et al.Establishment of CYP3A11 gene knock-down mouse by lentiviral transgenesis[J].J Third Mil Med Univ,2010,32(01):422. [6]王雪飞,张纲,裘松波,等.构建siRNA慢病毒载体调控人牙髓干细胞Delta1表达的实验研究[J].第三军医大学学报,2010,32(01):30.  Wang Xuefei,Zhang Gang,Qiu Songbo,et al.Regulation of Delta1 expression in DPSCs by specific siRNA lentivirus vector[J].J Third Mil Med Univ,2010,32(01):30. [7]赵丽娜,郝杰,胡建刚,等.PRP基因RNAi重组慢病毒制备及PRP基因与睾丸间质细胞增殖和睾酮产生的关系[J].第三军医大学学报,2011,33(11):1099.  Zhao Lina,Hao Jie,Hu Jiangang,et al.Preparation of proliferin related protein gene RNAi recombinant lentivirus and its biological function[J].J Third Mil Med Univ,2011,33(01):1099. [8]张志波,蔡磊,郑树国,等.Caveolin-1 RNA干扰慢病毒载体的构建及其对肝癌细胞株SMMC7721侵袭的影响[J].第三军医大学学报,2009,31(10):931.  ZHANG Zhi-bo,CAI Lei,ZHENG Shu-guo,et al.Construction of recombinant lentivirol expression vector carrying human Caveolin-1 with RNA interference and its effect on invasiveness of SMMC7721 cells[J].J Third Mil Med Univ,2009,31(01):931. [9]王延洲,梁志清,刘晓芳,等.Smad3基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J].第三军医大学学报,2009,31(08):701.  WANG Yan-zhou,LIANG Zhi-qing,LIU Xiao-fang,et al.Construction and identification of lentiviral vector encoding shRNA against Smad3[J].J Third Mil Med Univ,2009,31(01):701. [10]陈加荣,杨柳,戴刚,等.SPIO、GFP双重标记猪骨髓间充质干细胞的研究[J].第三军医大学学报,2011,33(21):2313.

Full-Text

Contact Us

service@oalib.com

QQ:3279437679

WhatsApp +8615387084133