%0 Journal Article
%T B7-H1慢病毒的制备及其在B16F10细胞中的表达鉴定
%A 张立群
%A 段文元
%A 许雪青
%A 黄钢
%A 陈雪丹
%A 白云
%J 第三军医大学学报
%P 24-27
%D 2007
%X 目的构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒，获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞。方法以小鼠B7-H1的测序质粒为模板，PCR扩增B7-H1全长，装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体，经过测序证实其序列与标准序列完全一致。将B7-H1表达载体用LipofectamineTM2000转染293FT细胞，包装成感染性病毒颗粒，感染B16F10细胞后，加入含Blasticidin(终浓度为4.0μg/ml)的RPMI1640培养基，筛选出稳定表达B7-H1蛋白的B16F10细胞株。结果PCR扩增得到编码小鼠B7-H1的877bp基因片段，与预期大小一致。B7-H1重组慢病毒感染B16F10细胞后，用B7-H1单抗进行免疫组化检测，荧光显微镜观察显示B7-H1分子表达于B16F10细胞。FACS测定B16F10细胞荧光阳性率为36%。结论成功构建了B7-H1慢病毒表达载体，包装出感染性病毒颗粒，重组慢病毒感染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H1膜表面蛋白，为进一步研究B7-H1分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤免疫逃逸机制中的作用奠定了基础。
%K B-H
%K 慢病毒
%K 基因治疗
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=061032