核因子NF-κBp65亚基TAD的克隆及表达

目的获得NF-κBp65亚基转录激活区域（transcriptionactivationdomain,TAD），构建真核表达载体并在内皮细胞中检测其表达。方法培养人脐静脉内皮细胞，提取总RNA，经RT-PCR得到p65TAD基因片段，测序正确后插入带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1，构建表达载体pEGFP-N1-p65TAD，然后转染内皮细胞，荧光显微镜下观察表达情况，同时用Westernblot分析蛋白的表达。结果有效地扩增了p65TAD783bp的目的基因片段。酶切结果表明所构建的含p65TAD基因的质粒与设计相同。p65TAD在脐静脉内皮细胞中得到了高效的表达。结论成功地构建了p65TAD的真核表达载体并实现了在内皮细胞中的高效表达。