Livin靶向RNA干扰对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的研究凋亡抑制蛋白Livin靶向RNA干扰MDA-MB-231对细胞增殖和凋亡的影响，探讨其可能的机制。方法构建3个靶向Livin的siRNA真核表达载体，分别转染乳腺癌细胞MDA-MB-231后，通过RT-PCR、Westernblot技术检测干扰前后MDA-MB-231细胞Livin、Caspase-3和Smac/DIABLO在mRNA、蛋白水平的表达；采用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用，流式细胞法测细胞周期，TUNEL法检测细胞凋亡以及观察细胞形态变化。结果成功构建了针对Livin基因的3个特异性siRNA表达载体。它们不同程度地抑制了MDA-MB-231细胞Livin基因的表达，以si-Livin2抑制效率最高，它对Livin的mRNA和蛋白的抑制率分别达76.4%，70.2%。si-Livin2转染48h后，与未转染组相比，细胞增殖活力受到抑制，转染48h抑制率达36.1％。细胞周期重新分布，G0/G1期上升为(71.75±1.31)％，S期下降为(18.06±1.46)％；细胞凋亡率上升为(13.28±1.65)％；电镜下可见典型的凋亡细胞特征。细胞内Caspase-3,Smac/DIABLO的mRNA、蛋白表达有所上升。结论Livin靶向RNA干扰通过上调Caspase-3,Smac/DIABLO表达有效地抑制MDA-MB-231细胞增殖，促进凋亡。