模拟微重力条件下小鼠拟胚体形成及分化的初步观察

目的研究模拟微重力条件下小鼠胚胎干细胞（embryonicstemcell,ESc）拟胚体（embryoidbodies,EBs）的形成及分化。方法胰酶消化普通培养的小鼠胚胎干细胞，调整细胞数为1×106？ml-1，移入可模拟微重力的旋转型生物反应器内进行培养，显微镜动态观察鼠EBs的形成，苏木精-伊红染色观察ESc的组织细胞分化情况，检测培养过程中乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase,LDH）的漏出量。取不同时相的EBs，接种6孔培养板培养3~5d，倒置相差显微镜观察EBs来源细胞的分化。结果生物反应器旋转培养24h即可肉眼观察到大量多细胞聚集体形成，相差显微镜和立体显微镜下发现，72h后细胞聚集体进一步形成均一的EBs。随培养时间延长EBs体积不断增大，并不断有新的EBs出现。HE染色显示，EBs中的ESc呈现多组织多细胞分化特征，培养后期（12d以后）较大EBs中心有不同程度的坏死，伴LDH漏出量的明显升高。接种EBs于6孔培养板后，镜下观察到不同类型的细胞，如内皮样细胞、成纤维样细胞、肝细胞样细胞、血管样结构以及可自发性搏动的心肌样细胞。结论ESc在模拟微重力条件下可大量快速形成EBs，伴有不同类型的组织细胞分化。旋转型生物反应器可作为ESc研究的有用工具。