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ISSN: 2333-9721
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一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白多克隆抗体制备

, PP. 1242-1245

Keywords: IRF-结合蛋白,原核表达,蛋白纯化,快速免疫法,多克隆抗体

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Abstract:

目的获得一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白(IRF-4?bindingprotein,IBP)的高效价特异性多克隆抗体。方法通过生物信息学分析选择IBP特异片段(1228~1893bp),目的片段cDNA插入pET32a和pGEX-KG原核表达载体,分别转化BL21感受态细菌,IPTG诱导表达后组合应用阴离子交换层析、His、GST亲和层析技术获得免疫原(pET32a/IBP融合蛋白)及检测原(pGEX-KG/IBP融合蛋白)。HPLC鉴定纯度。利用改良快速免疫法获得兔抗IBP多克隆抗血清,并经蛋白A柱纯化,非特异性抗体吸收。间接ELISA检测抗体滴度、Westernblot和免疫组化实验检测抗体特异性。结果表达并纯化的pET32a/IBP融合蛋白纯度达92%,pGEX-KG/IBP融合蛋白纯度达87%。IBP多克隆抗体滴度达1∶51200,能特异地和内源性IBP结合。结论成功表达并纯化了IBP融合蛋白,制备了高滴度、高特异性的抗IBP多克隆抗体。

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