小鼠支气管肺泡干细胞的培养鉴定和分选

目的对正常成年小鼠肺内支气管肺泡干细胞（bronchoalveolarstemcell，BASC）进行克隆培养、鉴定和流式细胞仪分选。方法用胶原酶和分散酶联合消化小鼠肺组织制备肺单细胞悬液，并经免疫磁珠分选Sca-1+细胞；胶原蛋白和小鼠Swiss-3T3成纤维细胞系包被培养板；无血清乳腺上皮细胞培养基培养Sca-1+细胞；双重免疫荧光染色Clara细胞抗原(CCA)和肺泡表面活性蛋白C（SP-C）鉴定BASC，并用流式细胞仪分选BASC。结果通过胶原酶和分散酶联合消化小鼠肺组织，平均每只成年小鼠可得到有核细胞总数(1.6～1.8)×107；经磁珠分选后的Sca-1+细胞纯度明显高于未经分选的肺Sca-1+细胞[分别为(87.3±5.9)%、（9.6±1.8）%，P<0.05]；在无血清乳腺上皮细胞培养基中Sca-1+细胞在第4天可形成BASC克隆和其他不表达CCA、SP-C的细胞克隆；流式细胞仪检测CD45-CD31-Sca-1+CD34+细胞占肺细胞总数的0.7%～1.1%，根据此分子标记能够分选出高纯度的BASC。结论通过胶原酶和分散酶联合消化，免疫磁珠分选的Sca-1+细胞在无血清乳腺上皮细胞培养基中能够形成非纯化的BASC克隆，而流式细胞仪可以分选出高纯度的BASC。