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ISSN: 2333-9721
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人α-防御素5在毕赤酵母中分泌表达的研究

, PP. 310-313

Keywords: 防御素,酵母表达,生物活性

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Abstract:

目的〖HTSS〗探索人α-防御素5成熟肽(mHD5)在酵母中高效分泌表达的可行性。方法PCR扩增获得酵母菌偏好的mHD5密码子序列,应用基因重组方法构建表达质粒,电击转化酵母菌株GS115,应用G418浓度梯度、表型和PCR技术筛选高拷贝转化株。经摇瓶发酵和甲醇诱导,Tricine-SDS-PAGE分析重组mHD5(rmHD5)表达量,并采用Westernblot鉴定。选用琼脂扩散法检测rmHD5的抑菌活性。结果构建了pPIC9K-mHD5酵母表达质粒。筛选得到3株His+/Mut+表型,且耐受8mg/mlG418的多拷贝转化酵母菌株,成功获得表达量约120mg/L的发酵上清。rmHD5对大肠杆菌(EC25922)和金黄色葡萄球菌(SA25923)2种标准菌株均具有明显的抑菌活性。结论防御素基因可以在毕赤酵母中实现分泌型离表达,此策略可能是抗菌肽工业化开发的有效途径之一。

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