%0 Journal Article
%T 人α-防御素5在毕赤酵母中分泌表达的研究
%A 王艾平
%A 粟永萍
%A 申明强
%A 王崧
%A 程天民
%A 王军平
%J 第三军医大学学报
%P 310-313
%D 2008
%X 目的〖HTSS〗探索人α-防御素5成熟肽(mHD5)在酵母中高效分泌表达的可行性。方法PCR扩增获得酵母菌偏好的mHD5密码子序列，应用基因重组方法构建表达质粒，电击转化酵母菌株GS115，应用G418浓度梯度、表型和PCR技术筛选高拷贝转化株。经摇瓶发酵和甲醇诱导，Tricine-SDS-PAGE分析重组mHD5(rmHD5)表达量，并采用Westernblot鉴定。选用琼脂扩散法检测rmHD5的抑菌活性。结果构建了pPIC9K-mHD5酵母表达质粒。筛选得到3株His+/Mut+表型，且耐受8mg/mlG418的多拷贝转化酵母菌株，成功获得表达量约120mg/L的发酵上清。rmHD5对大肠杆菌(EC25922)和金黄色葡萄球菌(SA25923)2种标准菌株均具有明显的抑菌活性。结论防御素基因可以在毕赤酵母中实现分泌型离表达，此策略可能是抗菌肽工业化开发的有效途径之一。
%K 防御素
%K 酵母表达
%K 生物活性
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=071176