全部 标题 作者
关键词 摘要

OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用:99美元

查看量下载量

相关文章

更多...

高糖负荷下人蛋白激酶Cβ2基因过表达内皮细胞模型的构建及鉴定

, PP. 1993-1996

Keywords: 蛋白激酶Cβ,腺病毒,高葡萄糖,细胞模型

Full-Text   Cite this paper   Add to My Lib

Abstract:

目的应用AdMax系统构建含人蛋白激酶Cβ2(proteinkinaseCβ2,PKCβ2)基因的重组腺病毒载体,转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),高糖刺激下观察蛋白量的表达,构建进一步功能研究的细胞模型。方法从pMD18-T-PRKCB1质粒中,扩增出人PRKCB1。所得片段定向克隆至穿梭质粒pDC315上,后与骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染293细胞,经同源重组构建腺病毒Ad-PRKCB1,TCID50测定重组病毒的滴度,免疫细胞化学和RT-PCR方法进行鉴定。构建成功后转染HUVEC,激光共聚焦显微镜(LSCM)下,观察高糖刺激下荧光蛋白转位及表达量,鉴定细胞模型构建。结果通过酶切鉴定目的片段正确插入穿梭质粒。倒置显微镜下观察到细胞的病变效应。测得病毒滴度为7.9×109IU/ml,免疫细胞化学和RT-PCR验证了目的蛋白表达。LSCM下观察到高糖负荷下荧光蛋白转位及过表达。结论成功构建了含PRKCB1基因的重组腺病毒载体并在高葡萄糖负荷下观察到其活化及蛋白过表达,为下一步信号蛋白组学研究提供分子工具。

References

[1]  段炼, 林雪波, 周波. 高糖负荷下人蛋白激酶Cβ2基因过表达内皮细胞模型的构建及鉴定[J]. 第三军医大学学报,2009,31(20):1993-1996.
[2]  钟诚,姜振东,张学渊.大鼠促红细胞生成素重组腺病毒载体的构建及其在大鼠SGNs中的表达[J].第三军医大学学报,2012,34(18):1818.  Zhong Cheng,Jiang Zhendong,Zhang Xueyuan.Construction and expression of recombinant adenovirus vector of erythropoietin in rat spiral ganglion neurons[J].J Third Mil Med Univ,2012,34(20):1818. [2]杜先智,周向东.天然抗菌多肽elafin重组腺病毒载体构建及气道上皮细胞表达[J].第三军医大学学报,2007,29(11):1042.  DU Xian-zhi,ZHOU Xiang-dong.Construction of recombinant adenovirus vector Ad-elafin for nature antibiotic elafin gene and its expression in primary airway epithelium[J].J Third Mil Med Univ,2007,29(20):1042. [3]郝磊,邹仲敏,王军平,等.hPDGF-A/hBD2双基因共表达腺病毒载体的构建及表达[J].第三军医大学学报,2007,29(10):859.  HAO Lei,ZOU Zhong-min,WANG Jun-ping,et al.Construction and identification of recombinant adenovirus expressing hPDGF-A and hBD2[J].J Third Mil Med Univ,2007,29(20):859. [4]方针强,叶钢,欧阳一辛,等.人BMP-7基因重组腺病毒的构建与鉴定[J].第三军医大学学报,2008,30(02):153.  FANG Zhen-qiang,YE Gang,OUYANG Yi-xin,et al.Construction and identification of human BMP-7 gene recombinant adenovirus[J].J Third Mil Med Univ,2008,30(20):153. [5]蒋春华,高钰琪,黄庆愿,等.人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定[J].第三军医大学学报,2006,28(20):2040. [6]宋敏,白云,段文元,等.重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达[J].第三军医大学学报,2007,29(09):806.  SONG Min,BAI Yun,DUAN Wen-yuan,et al.Construction, expression and identification of recombinant adenovirus Ad-VIP in 293 cells[J].J Third Mil Med Univ,2007,29(20):806. [7]陈勇,江军,张尧,等.含rPB-DR启动子和TK基因的重组腺病毒的构建和鉴定[J].第三军医大学学报,2006,28(10):1043. [8]田文标,陈丽芬,邹全明.人p16基因的重组腺病毒构建及鉴定[J].第三军医大学学报,2005,27(22):2213. [9]孙泽林,张云鹤,戚晓渊,等.重组腺病毒携带外源p16基因抑制人脑恶性胶质瘤细胞系生长的研究[J].第三军医大学学报,2005,27(22):2216. [10]王耿,何国祥,冉擘力,等.腺病毒介导gax基因转染对血管平滑肌细胞迁移的影响[J].第三军医大学学报,2005,27(14):1443.

Full-Text

Contact Us

service@oalib.com

QQ:3279437679

WhatsApp +8615387084133