%0 Journal Article
%T 高糖负荷下人蛋白激酶Cβ2基因过表达内皮细胞模型的构建及鉴定
%A 段炼
%A 林雪波
%A 周波
%J 第三军医大学学报
%P 1993-1996
%D 2009
%X 目的应用AdMax系统构建含人蛋白激酶Cβ2(proteinkinaseCβ2,PKCβ2)基因的重组腺病毒载体，转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，高糖刺激下观察蛋白量的表达，构建进一步功能研究的细胞模型。方法从pMD18-T-PRKCB1质粒中，扩增出人PRKCB1。所得片段定向克隆至穿梭质粒pDC315上，后与骨架质粒pBHGlox△E1，3Cre共转染293细胞，经同源重组构建腺病毒Ad-PRKCB1，TCID50测定重组病毒的滴度，免疫细胞化学和RT-PCR方法进行鉴定。构建成功后转染HUVEC，激光共聚焦显微镜(LSCM)下，观察高糖刺激下荧光蛋白转位及表达量,鉴定细胞模型构建。结果通过酶切鉴定目的片段正确插入穿梭质粒。倒置显微镜下观察到细胞的病变效应。测得病毒滴度为7.9×109IU/ml，免疫细胞化学和RT-PCR验证了目的蛋白表达。LSCM下观察到高糖负荷下荧光蛋白转位及过表达。结论成功构建了含PRKCB1基因的重组腺病毒载体并在高葡萄糖负荷下观察到其活化及蛋白过表达，为下一步信号蛋白组学研究提供分子工具。
%K 蛋白激酶Cβ
%K 腺病毒
%K 高葡萄糖
%K 细胞模型
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=200902028