人脐血内皮祖细胞体外扩增、鉴定和生物学活性

目的建立一种稳定的体外分离培养和鉴定人脐血内皮祖细胞（endothelialprogenitorcells，EPCs）的方法，并探讨利于EPCs增殖的最佳接种浓度。方法采用密度梯度离心法分离得到单个核细胞，制成1×106/ml、1.5×106/ml、2×106/ml、2.5×106/ml、3×106/ml、3.5×106/ml、4×106/ml7个密度接种于铺被人纤维连接蛋白的培养瓶，比较各接种密度的贴壁细胞数和细胞集落形成情况，并采用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和免疫荧光鉴定EPCs。结果不同接种密度得到的贴壁细胞数和细胞集落数有差别，在2.5×106/ml密度接种时得到的最佳贴壁细胞数和细胞集落数，与其他密度比较差异有统计学意义（P<0.05）；双染色阳性细胞为正在分化EPCs；流式细胞仪检测内皮祖细胞对CD34、AC133、VEGFR2的阳性表达率分别为（1.67±0.35）%、（12.63±9.70）%、（66.81±6.63）%；免疫荧光检测内皮祖细胞一致性表达CD34、AC133、VEGFR2；黏附能力和迁移能力检测结果分别为（33.7±1.6）、（29.2±1.2）。结论采用Ficoll密度梯度离心法结合贴壁筛选法可以较好地分离人脐血EPCs，以2.5×106/ml的密度接种培养可获得良好的细胞分化和增殖。