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ISSN: 2333-9721
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PLCεshRNA质粒构建及功能鉴定

, PP. 1657-1660

Keywords: 载体构建,膀胱癌,shRNA,PLCε

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Abstract:

目的构建PLCε基因的shRNA表达载体及其功能鉴定。方法设计并合成针对PLCε基因mRNA的寡核苷酸序列,插入绿色荧光蛋白质粒真核表达载体pGenesil中构建重组载体pGenesil-PLCε。重组载体经酶切、测序鉴定后转染膀胱癌细胞,RT-PCR及Westernblot检测对膀胱癌细胞株PLCε的抑制作用,流式细胞术(FCM)及MTT检测其对膀胱癌细胞株增殖活力影响。结果成功构建了针对2个PLCε基因的shRNA表达载体。RT-PCR、Westernblot检测结果显示:2个重组质粒载体转染T24细胞株后对PLCεmRNA及对PLCε蛋白表达均有明显抑制,流式细胞术结果表明细胞阻滞于G0/G1期,MTT检测表明重组的载体质粒明显抑制T24细胞增殖活力。结论针对PLCε基因的shRNA能有效抑制膀胱癌T24细胞中PLCε基因的表达及膀胱癌细胞增殖。

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