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ISSN: 2333-9721
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应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带β-半乳糖苷酶基因重组腺病毒的实验研究

, PP. 1649-1652

Keywords: 腺病毒,β-半乳糖苷酶,基因治疗,转染,乳糖不耐受症

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Abstract:

目的应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)基因重组腺病毒。方法将β-gal基因克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,在BJ5183大肠杆菌内与pAdEasy1骨架质粒完成同源重组;经脂质体介导转入HEK293细胞包装、扩增并经反复乒乓感染获得携带β-gal基因的重组腺病毒Ad-β-gal;有限稀释法检测病毒滴度;X-gal组织化学染色检测重组腺病毒Ad-β-gal在HEK293细胞中的功能。结果成功构建携带β-gal基因的重组腺病毒Ad-β-gal,病毒滴度达(2.5~4.0)×1011EFU/ml;感染复数(multiplicityofinfection,MOI)为10时对HEK293细胞48h转染率达70%,并在X-gal试剂作用下,细胞呈现蓝色。结论成功构建了携带β-gal基因的重组腺病毒,能高效感染293细胞,并功能性表达β-半乳糖苷酶。

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