%0 Journal Article %T 应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带β-半乳糖苷酶基因重组腺病毒的实验研究 %A 洪思琦 %A 王佚 %A 毕杨 %A 郭振华 %J 第三军医大学学报 %P 1649-1652 %D 2009 %X 目的应用AdEasy腺病毒改良载体系统构建携带β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)基因重组腺病毒。方法将β-gal基因克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,在BJ5183大肠杆菌内与pAdEasy1骨架质粒完成同源重组;经脂质体介导转入HEK293细胞包装、扩增并经反复乒乓感染获得携带β-gal基因的重组腺病毒Ad-β-gal;有限稀释法检测病毒滴度;X-gal组织化学染色检测重组腺病毒Ad-β-gal在HEK293细胞中的功能。结果成功构建携带β-gal基因的重组腺病毒Ad-β-gal,病毒滴度达(2.5~4.0)×1011EFU/ml;感染复数(multiplicityofinfection,MOI)为10时对HEK293细胞48h转染率达70%,并在X-gal试剂作用下,细胞呈现蓝色。结论成功构建了携带β-gal基因的重组腺病毒,能高效感染293细胞,并功能性表达β-半乳糖苷酶。 %K 腺病毒 %K β-半乳糖苷酶 %K 基因治疗 %K 转染 %K 乳糖不耐受症 %U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=200812160