利用重叠PCR实现乙肝表面抗原CTL表位的替换

目的以磷酸酰肌醇蛋白聚糖-3蛋白(glypican-3，GPC3)的CTL表位EYILSLEEL替换HBsAg中内源性CTL表位LLD，构建用于预防和治疗乙肝的DNA疫苗。方法以重组表面抗原基因pcHBsAg质粒为模板，应用重叠延伸PCR扩增出含EYILSLEEL表位的HBsAg基因HBsAg/GPC3，将其插入pBSSK+载体中，构建出pBSSK/GPC3载体。利用DNA重组技术将其定向插入真核表达载体pcDNA3.1+中，将真核表达载体经PCR、酶切和测序鉴定，构建表达CTL表位EYILSLEEL的DNA疫苗。结果酶切和测序的结果显示序列无错配，获得了完整表达EYILSLEEL表位的真核质粒pcDNA3-HBsAg/GPC3。结论成功将EYILSLEEL表位替换HBsAg的内源性CTL表位，构建了pcDNA3-HBsAg/GPC3真核表达质粒。