新基因HA117最佳siRNA的筛选及重组腺病毒构建

目的验证pSOS-HUS筛选目的基因最佳siRNA的效果，应用pSOS-HUS筛选新基因HA117最佳siRNA，构建携带HA117基因最佳siRNA转录模板DNA的重组腺病毒。方法构建携带HA117基因及其siRNA模板DNA链的双克隆质粒。把双克隆质粒分别转染293细胞，通过镜下观察、流式细胞仪检测比较绿色荧光表达强度，RT-PCR检测HA117基因mRNA表达，筛选鉴定基因HA117最佳siRNA。构建HA117基因RNA干扰重组腺病毒。结果从5对模板DNA链中筛选出最有效片段HAi5，构建携带HAi5的重组腺病毒。结论载体pSOS-HUS可快捷有效地筛选目的基因的最佳siRNA;在5对模板DNA中，HAi5转录的siRNA对新基因HA117干扰效果最强；成功构建携带HAi5的重组腺病毒。