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ISSN: 2333-9721
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PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体的构建、鉴定与表达

, PP. 364-368

Keywords: 腺病毒,胰腺十二指肠同源框基因,NK转录因子相关,基因座,间充质干细胞

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Abstract:

目的运用pADxsi系统构建带人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。方法采用基因克隆技术,将目的基因NKX6.1克隆至pShuttle-GFP-CMV中,得到pShuttle-GFP-CMV-NKX6.1;将PDX1克隆至pShuttle-CMV-GFP/CMV-NKX6.1上,替换掉GFP,得到pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1;将CMV-PDX1/CMV-NKX6.1从pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1转移到ADxsi骨架载体上,得到pADxsi-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1,在293细胞中进行包装与扩增活病毒,病毒滴度测定;体外感染人胎肝间充质干细胞。结果分别酶切重组人PDX1与NKX6.1基因表达穿梭质粒与腺病毒载体质粒,阳性克隆均获得与理论相一致的目的条带;重组腺病毒感染人胎肝间充质干细胞比例达90%以上;RT-PCR结果表明目的基因在人胎肝间充质干细胞内能稳定表达;免疫细胞化学与间接荧光检测目的PDX1与NKX6.1蛋白分子均特异在细胞核表达。结论应用pADxsi系统重组技术成功构建了人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。

References

[1]  唐小龙,张荣波,汪雪峰,等. PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体的构建、鉴定与表达[J]. 第三军医大学学报,2010,32(4):364-368.
[2]  钟诚,姜振东,张学渊.大鼠促红细胞生成素重组腺病毒载体的构建及其在大鼠SGNs中的表达[J].第三军医大学学报,2012,34(18):1818.  Zhong Cheng,Jiang Zhendong,Zhang Xueyuan.Construction and expression of recombinant adenovirus vector of erythropoietin in rat spiral ganglion neurons[J].J Third Mil Med Univ,2012,34(04):1818. [2]杜先智,周向东.天然抗菌多肽elafin重组腺病毒载体构建及气道上皮细胞表达[J].第三军医大学学报,2007,29(11):1042.  DU Xian-zhi,ZHOU Xiang-dong.Construction of recombinant adenovirus vector Ad-elafin for nature antibiotic elafin gene and its expression in primary airway epithelium[J].J Third Mil Med Univ,2007,29(04):1042. [3]郝磊,邹仲敏,王军平,等.hPDGF-A/hBD2双基因共表达腺病毒载体的构建及表达[J].第三军医大学学报,2007,29(10):859.  HAO Lei,ZOU Zhong-min,WANG Jun-ping,et al.Construction and identification of recombinant adenovirus expressing hPDGF-A and hBD2[J].J Third Mil Med Univ,2007,29(04):859. [4]方针强,叶钢,欧阳一辛,等.人BMP-7基因重组腺病毒的构建与鉴定[J].第三军医大学学报,2008,30(02):153.  FANG Zhen-qiang,YE Gang,OUYANG Yi-xin,et al.Construction and identification of human BMP-7 gene recombinant adenovirus[J].J Third Mil Med Univ,2008,30(04):153. [5]蒋春华,高钰琪,黄庆愿,等.人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定[J].第三军医大学学报,2006,28(20):2040. [6]宋敏,白云,段文元,等.重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达[J].第三军医大学学报,2007,29(09):806.  SONG Min,BAI Yun,DUAN Wen-yuan,et al.Construction, expression and identification of recombinant adenovirus Ad-VIP in 293 cells[J].J Third Mil Med Univ,2007,29(04):806. [7]陈勇,江军,张尧,等.含rPB-DR启动子和TK基因的重组腺病毒的构建和鉴定[J].第三军医大学学报,2006,28(10):1043. [8]田文标,陈丽芬,邹全明.人p16基因的重组腺病毒构建及鉴定[J].第三军医大学学报,2005,27(22):2213. [9]孙泽林,张云鹤,戚晓渊,等.重组腺病毒携带外源p16基因抑制人脑恶性胶质瘤细胞系生长的研究[J].第三军医大学学报,2005,27(22):2216. [10]王耿,何国祥,冉擘力,等.腺病毒介导gax基因转染对血管平滑肌细胞迁移的影响[J].第三军医大学学报,2005,27(14):1443.

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