%0 Journal Article
%T PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体的构建、鉴定与表达
%A 唐小龙
%A 张荣波
%A 汪雪峰
%A 张文
%J 第三军医大学学报
%P 364-368
%D 2010
%X 目的运用pADxsi系统构建带人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。方法采用基因克隆技术，将目的基因NKX6.1克隆至pShuttle-GFP-CMV中，得到pShuttle-GFP-CMV-NKX6.1；将PDX1克隆至pShuttle-CMV-GFP/CMV-NKX6.1上，替换掉GFP，得到pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1；将CMV-PDX1/CMV-NKX6.1从pShuttle-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1转移到ADxsi骨架载体上，得到pADxsi-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1，在293细胞中进行包装与扩增活病毒，病毒滴度测定；体外感染人胎肝间充质干细胞。结果分别酶切重组人PDX1与NKX6.1基因表达穿梭质粒与腺病毒载体质粒，阳性克隆均获得与理论相一致的目的条带；重组腺病毒感染人胎肝间充质干细胞比例达90%以上；RT-PCR结果表明目的基因在人胎肝间充质干细胞内能稳定表达；免疫细胞化学与间接荧光检测目的PDX1与NKX6.1蛋白分子均特异在细胞核表达。结论应用pADxsi系统重组技术成功构建了人PDX1与NKX6.1双基因表达腺病毒载体。
%K 腺病毒
%K 胰腺十二指肠同源框基因
%K NK转录因子相关
%K 基因座
%K 间充质干细胞
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=200908005