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ISSN: 2333-9721
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RPS14基因重组慢病毒载体的构建及其在MUTZ-8细胞中的表达

, PP. 2252-2255

Keywords: RPS基因,慢病毒载体,骨髓增生异常综合征

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Abstract:

目的构建携带人RPS14基因重组慢病毒载体获得稳定产毒的细胞,并观察其在人MDS细胞株MUTZ-8细胞中的表达。方法通过反转录方法,获得目的基因RPS14;将目的基因克隆入慢病毒表达质粒pGC-FUVector,构建含有RPS14基因的重组慢病毒载体pGC-FURPS14,经PCR、酶切及测序鉴定其正确性;在Lipofectamine2000介导下,将成功构建的质粒pGC-FURPS14与慢病毒包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,通过实时定量PCR法测定病毒滴度,并将获得的重组慢病毒载体pGC-FURPS14转染人MDS细胞株MUTZ-8,用流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR检测靶细胞内RPS14mRNA的表达。结果含有RPS14基因的重组慢病毒载体经PCR、酶切和测序鉴定构建正确,且测定的病毒滴度为2.0×109TU/ml。流式细胞仪检测其转染效率为68.41%,RT-PCR检测到转染后RPS14mRNA在靶细胞中的稳定表达。结论构建了携带人RPS14基因的慢病毒载体,转染人MUTZ-8细胞株后能够稳定表达RPS14基因。

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