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ISSN: 2333-9721
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猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定

, PP. 1904-1906

Keywords: APOBECF,克隆,真核表达载体,鉴定

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Abstract:

目的克隆猪载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoproteinBmRNAeditingenzyme,catalyticpolypeptide3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法分离4头21周龄,体质量25~30kg的雌性健康五指山猪的外周血单个核细胞,Trizol法提取细胞总RNA,RT-PCR特异性扩增目的基因,目的基因插入真核表达载体pDsRed1-N1及改造的pCDNA3-Flage载体构建表达质粒并在PK-15细胞中进行表达。激光共聚焦显微镜及Westernblot鉴定目的基因的表达。结果克隆的目的基因与公布的基因序列同源性达99%;激光共聚焦显微镜显示目的基因在PK-15细胞表达,且表达产物定位于细胞质内;Westernblot检测示表达的目的蛋白大小与预期相符。结论成功构建了猪APOBEC3F真核表达载体。

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