人eIF4A3真核表达载体构建及稳定表达细胞株筛选

目的构建人eIF4A3重组质粒载体,筛选高表达人eIF4A3的稳定细胞株。方法RT-PCR克隆eIF4A3基因，将获得的基因片段分别连接到含有HA和c-myc标签的质粒载体上，转染HeLa细胞，经G418筛选获稳定表达细胞株，在体外翻译体系中进行体外翻译，通过免疫印迹鉴定eIF4A3的表达。结果成功构建人eIF4A3的真核表达载体，可在HeLa细胞中稳定表达，且能在体外翻译体系中翻译eIF4A3蛋白质。功能研究初步证明eIF4A3可以抑制荧光素酶报告基因的表达。结论获得了可稳定高表达人eIF4A3的HeLa细胞株及可用于体外翻译的真核表达载体。