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ISSN: 2333-9721
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1.1倍全长HBV基因组克隆转染细胞系的建立

, PP. 1672-1675

Keywords: 乙肝病毒,HepG细胞,稳定细胞株

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Abstract:

目的构建pneo-CH9/3091真核表达质粒,并建立其稳定表达的HepG2细胞系。方法质粒pCH9/3091包含HBV1.1倍体和CMV启动子,将PCR扩增出的带有新霉素(neo)抗性的基因片段插入pCH9/3091构建成重组质粒pneo-CH9/3091。重组质粒经酶切,测序验证正确后,通过脂质体介导转入人肝癌细胞HepG2。G418筛选后,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所得单克隆细胞培养上清液的HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),PCR检测细胞上清液的病毒颗粒,Westernblot检测细胞内HBV核心蛋白(HBcAg)的表达,以及Southernblot检测细胞内核心颗粒HBVDNA的复制情况。结果有3株细胞系培养上清HBsAg和HBeAg检测呈现阳性,且HBVC区片段可通过PCR扩增出来,Westernbot结果提示只有细胞株HepG2-H7可以表达HBV核心蛋白。Southernblot结果说明此细胞株基因组中有HBV基因组的稳定整合,并且能在细胞内检测出HBVDNA复制中间体。结论成功构建1株HBV稳定整合细胞株HepG2-H7,能持续产生HBV病毒颗粒。

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