%0 Journal Article
%T 1.1倍全长HBV基因组克隆转染细胞系的建立
%A 罗强
%A 苏怀彬
%A 梁盼盼
%A 袁作为
%A 张文露
%A 黄爱龙
%A 胡接力
%J 第三军医大学学报
%P 1672-1675
%D 2011
%X 目的构建pneo-CH9/3091真核表达质粒，并建立其稳定表达的HepG2细胞系。方法质粒pCH9/3091包含HBV1.1倍体和CMV启动子，将PCR扩增出的带有新霉素（neo）抗性的基因片段插入pCH9/3091构建成重组质粒pneo-CH9/3091。重组质粒经酶切，测序验证正确后，通过脂质体介导转入人肝癌细胞HepG2。G418筛选后，利用酶联免疫吸附法（ELISA）检测所得单克隆细胞培养上清液的HBV表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg），PCR检测细胞上清液的病毒颗粒，Westernblot检测细胞内HBV核心蛋白（HBcAg）的表达，以及Southernblot检测细胞内核心颗粒HBVDNA的复制情况。结果有3株细胞系培养上清HBsAg和HBeAg检测呈现阳性，且HBVC区片段可通过PCR扩增出来，Westernbot结果提示只有细胞株HepG2-H7可以表达HBV核心蛋白。Southernblot结果说明此细胞株基因组中有HBV基因组的稳定整合，并且能在细胞内检测出HBVDNA复制中间体。结论成功构建1株HBV稳定整合细胞株HepG2-H7，能持续产生HBV病毒颗粒。
%K 乙肝病毒
%K HepG细胞
%K 稳定细胞株
%U http://aammt.tmmu.edu.cn/oa/darticle.aspx?type=view&id=201102138