抗hMIF单克隆抗体的活性鉴定及其对脓毒症小鼠的保护作用

目的对制备的人巨噬细胞移动抑制因子（anti-humanmacrophagemigrationinhibitoryfactor,hMIF）单克隆抗体进行生物学活性鉴定，并研究其对脓毒症小鼠的保护作用。方法通过ELISA、Westernblot、免疫组织化学等方法鉴定抗MIF单克隆抗体F11的亚类、抗体亲和力及特异性；通过一氧化氮（nitricoxide,NO）释放抑制试验和异构酶活性抑制试验，鉴定F11抗体的生物学活性；选用C57BL/6J小鼠构建CLP、LPS诱导脓毒症模型，研究F11抗体对脓毒症小鼠生存率的保护作用及对血清细胞因子TNF-α、IL-6的影响。结果F11抗体亚类为IgG1型，亲和力为2.5×1010，Westernblot及免疫组织化学显示强阳性；F11抗体显著抑制MIF刺激RAW264.7细胞释放NO（P<0.01）及MIF异构酶活性（P<0.01）；明显提高脓毒症小鼠生存率（CLP模型：P<0.01，LPS模型：P<0.05）且具有剂量依赖关系，并对CLP术后血清TNF-α和IL-6的升高具有明显抑制作用（P<0.05）。结论成功制备了高特异性、高亲和力、具有异构酶活性抑制作用的抗MIF单克隆抗体，显著提高致脓毒症模型小鼠生存率并降低小鼠血清TNF-α、IL-6水平。