人PGI基因siRNA慢病毒质粒的构建及对白血病细胞增殖的影响

目的构建共表达绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）基因和人磷酸葡萄糖异构酶（phosphoglucoseisomerase，PGI）基因的慢病毒载体，初步探讨干扰人PGI基因对白血病细胞增殖的影响。方法RT-PCR、Westernblot检测人单核细胞、K562、KG1-α、HL-60细胞中PGImRNA和蛋白表达水平，筛选高表达PGI的白血病细胞系；构建人PGI基因siRNA的慢病毒载体及阴性对照，经293T细胞包装后，获得可表达人PGI基因siRNA的慢病毒载体及阴性对照；分别使用重组病毒（干扰组）、原始病毒（阴性对照组）和等量PBS（空白对照组）转染白血病KG1-α细胞，筛选稳定转染细胞株。RT-PCR和Westernblot检测干扰组、阴性对照组及空白对照组KG1-α细胞PGI基因表达水平；CCK-8检测各组细胞增殖情况并作生长曲线。结果PGI基因在白血病KG1-a细胞中高表达；成功构建了稳定低表达PGI的白血病细胞株（KG1-α-siPGI）；低表达PGI基因的KG1-α细胞增殖能力较空白对照组明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论成功构建了低表达PGI基因的白血病KG1-α细胞株，干扰PGI基因的表达能够抑制KG1-α细胞的生长。