应用Lv-pNanog-GFP慢病毒载体探讨Nanog在调控结直肠癌细胞的自我更新与转移能力中的作用

目的探讨干细胞标记物Nanog对结直肠癌细胞的自我更新以及转移能力的影响。方法将本实验室已构建的Nanog启动子携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体Lv-pNanog-GFP感染人结直肠癌细胞系HCT116，并经流式分选得到GFP表达阳性和阴性的细胞，通过Westernblot检测病毒的有效性，克隆形成实验和成球实验检测肿瘤细胞的自我更新能力，Transwell实验检测肿瘤细胞的转移能力。结果细胞系在感染病毒12h后，倒置荧光显微镜下可观察到GFP的荧光表达，说明病毒Lv-pNanog-GFP可稳定感染人结直肠癌细胞HCT116，且GFP的阳性率为5.9%。Westernblot结果显示，根据GFP所分选出的细胞能准确的对应Nanog的表达量。Nanog阳性细胞的克隆形成率[（56.3±2.87）%]显著大于Nanog阴性细胞的克隆形成率[（19±2.16）%]（P<0.05）。Nanog阳性细胞所形成的干细胞球体积明显增大且成球率[（34±4）%]显著大于Nanog阴性细胞[（10.67±6.43）%]（P<0.05），说明Nanog阳性细胞具有更强的自我更新能力。Nanog阳性细胞穿过Transwell小室的细胞数（175.8±12.89）比Nanog阴性细胞（74.6±16.55）显著增多（P<0.05），说明Nanog阳性细胞具有更强的转移能力。结论在结直肠癌细胞中Nanog调控肿瘤细胞的自我更新以及转移能力。