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中国公共卫生 2007
小鼠Cdc25B融合蛋白构建和表达DOI: 10.11847/zgggws2007-23-08-42, PP. 976-977 Keywords: Cdc25B,基因表达,谷胱甘肽转移酶(GST),聚合酶链式反应 Abstract: ？目的研究小鼠N末端缺失286氨基酸的野生型Cdc25B原核表达载体的构建和表达.方法应用Primer5.0软件分析并设计小鼠Cdc25B5′及3′端引物(N末端缺失286氨基酶),化学合成并用聚合酶链反就(PCR)方法扩增,经限制性内切酶酶切后连接原核表达载体PGEX4T-2,构建成PGEX4T-2-Cdc25B融合表达载体,转化大肠埃希菌BL21后,通过异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导进行目的蛋白表达.结果通过双酶切、电泳分析及测序证明成功构建了Cdc25B融合表达载体,融合蛋白产物经蛋白印迹(Westernblot)显示,相对分子量为53KD的蛋白谱带,与预期一致.结论成功构建并表达了Cdc25B-N末端缺失的基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为近一步研究Cdc25B的功能提供基础依据.
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