低拷贝HBV病毒全长DNA的制备和体外复制水平的鉴定

目的：从乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）低拷贝的血清样本中提取病毒DNA并通过PCR扩增得到全长DNA片段。将全长片段经过环化处理后转染HuH7细胞，体外评价病毒的复制水平。方法：设计含有BspQⅠ酶切位点的HBV全长扩增引物和分段扩增引物，选择HBV低拷贝的临床病人血清样本，经抽提纯化后的病毒DNA作为模板，用巢式PCR结合分段扩增的方法扩增得到HBV全长DNA，PCR产物经BspQⅠ酶切后自连环化，将环化的HBVDNA转染HuH7细胞，经5d细胞培养，提取细胞中的病毒复制中间体，通过Southernblot分析病毒复制水平。结果：通过PCR扩增得到5个HBV全长DNA，经过酶切连接全长基因后转染HuH7细胞，Southernblot检测均有复制表达。结论：本实验成功构建能够有复制表达的HBV环化全长，为研究血清中低拷贝HBV病毒的不同病人复制水平与DNA序列关系打下基础。