%0 Journal Article %T 低拷贝HBV病毒全长DNA的制备和体外复制水平的鉴定 %A 杜 茜 %A 马其欢 %A 龚旭阳 %A 蔡雪飞 %J 重庆医科大学学报 %D 2013 %X 目的:从乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)低拷贝的血清样本中提取病毒DNA并通过PCR扩增得到全长DNA片段。将全长片段经过环化处理后转染HuH7细胞,体外评价病毒的复制水平。方法:设计含有BspQⅠ酶切位点的HBV全长扩增引物和分段扩增引物,选择HBV低拷贝的临床病人血清样本,经抽提纯化后的病毒DNA作为模板,用巢式PCR结合分段扩增的方法扩增得到HBV全长DNA,PCR产物经BspQⅠ酶切后自连环化,将环化的HBVDNA转染HuH7细胞,经5d细胞培养,提取细胞中的病毒复制中间体,通过Southernblot分析病毒复制水平。结果:通过PCR扩增得到5个HBV全长DNA,经过酶切连接全长基因后转染HuH7细胞,Southernblot检测均有复制表达。结论:本实验成功构建能够有复制表达的HBV环化全长,为研究血清中低拷贝HBV病毒的不同病人复制水平与DNA序列关系打下基础。 %K 低拷贝 %K 乙肝病毒 %K 全长扩增 %K 闭合环状DNA %U http://cyxb.alljournals.ac.cn/cqydxb/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20130420&flag=1