设计特异性结合HBVX基因启动子的人工锌指蛋白以抑制HepG2.2.15细胞中HBV的转录

目的：设计人工锌指蛋白（zincfingerprotein，ZFP）特异性结合于乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitisBvirusXprotein，HBX）基因启动子，观察ZFP在体外对乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）转录的抑制。方法：将pcDNA3.1-ZFP转染入HepG2.2.15细胞24h后，用Westernblot检测HBX蛋白的含量；用ELISA和real-timePCR检测上清液中乙型肝炎核心相关抗原（hepatitisBeantigen，HBeAg）和HBVDNA含量，用RT-PCR检测胞内HBVmRNA水平。结果：ZFP可抑制HepG2.2.15细胞中HBX的表达；相比空质粒组，ZFP组细胞培养上清液中HBVDNA拷贝量和HBeAg含量分别下降了51.7%（t=23.079，P=0.000，９５％CI=44.98%～58.52%）、33.8%（t=3.887，P=0.003，９５％CI=12.12%～55.48%）；细胞内HBVmRNA也明显减少（t=3.616，P=0.022）。结论：人工设计的可特异性结合于HBX的ZFP可于HepG2.2.15细胞中有效抑制HBV转录。