miR-124-3p通过负调控Caveolin-1表达N2a/APPswe细胞凋亡率及细胞内钙离子浓度

目的：探讨在阿尔茨海默病（Alzheimer’sdiseases，AD）细胞模型中miR-124-3p通过调控Caveolin-1的表达对细胞凋亡率及钙离子浓度的影响。方法：体外培养野生型N2a（N2a/WT）和N2a/APPswe细胞，real-timePCR及Westernblot分别检测miR-124-3p与β-淀粉样蛋白前体蛋白（β-amyloidprecursorprotein，APP）mRNA及蛋白的表达。双荧光素酶报告实验分析miR-124-3p与Caveolin-1之间靶向调控关系。N2a/APPswe细胞瞬时转染miR-124-3p模拟物（mimics），real-timePCR、Westernblot分别检测Caveolin-1mRNA和蛋白的表达。N2a/APPswe细胞分别瞬时转染miR-124-3p模拟物（mimics）、pcDNA-Caveolin-1、Caveolin-1-siRNA，流式细胞仪分析细胞凋亡水平，测定细胞内游离钙离子浓度。结果：与WT组相比，APPswe组APPmRNA和蛋白水平表达都明显升高（分别为P=0.000，P=0.000），miR-124-3p表达明显降低（P=0.000）。双荧光素酶报告实验表明，和与突变型载体（pGL3-Caveolin-13’UTRMUT）共转染组相比，与野生型载体（pGL3-Caveolin-13’UTRWT）共转染组的相对荧光素酶活性和明显减弱（P=0.004）；转染miR-124-3pmimics后，与空载体组比较，miR-124-3pmimcs转染组的Caveolin-1mRNA和蛋白的表达明显下调（分别为P=0.000，P=0.000）；分别转染miR-124-3pmimics、Caveolin-1-siRNA后，与空载体组比较，细胞凋亡率降低（分别为P=0.000，P=0.000），游离钙离子浓度降低（分别为P=0.000，P=0.000）；转染pcDNA-Caveolin-1后，得到与上述相反的结果（分别为P=0.000，P=0.000）。结论：miR-124-3p可以通过靶向下调Caveolin-1的表达，抑制AD细胞凋亡，降低细胞中游离钙离子浓度，从而发挥神经保护作用，为AD的防治提供新的思路和靶点。