蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子表达对喉癌细胞株Hep-2增殖的影响及相关机制研究

目的：研究蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子（cancerousinhibitorofproteinphosphatase2A，CIP2A）表达对喉癌细胞株Hep-2增殖的影响及相关分子机制。方法：以特异性siRNA和阴性对照序列转染喉癌Hep-2细胞，实验分为CIP2AsiRNA组与ControlsiRNA组。平板克隆形成实验检测CIP2A在喉癌细胞增殖中的作用；MTT法检测CIP2A对细胞生长曲线及顺铂敏感性影响；流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡率的改变。real-timePCR检测CIP2AmRNA表达水平，Westernblot检测CIP2A及生长相关蛋白c-myc、AKT、p-AKT、cyclinD1的蛋白表达水平。结果：沉默CIP2A后，CIP2A在基因及蛋白水平的表达量明显降低，Hep-2细胞生长减缓，克隆的形成被抑制，ControlsiRNA组为339.00±34.00，CIP2AsiRNA组为126.00±33.00，差异有统计学意义（t=-7.796，P=0.010）；沉默CIP2A可增加喉癌细胞对顺铂的敏感性，ControlsiRNA组IC50为（6.67±0.54）?滋g/ml，CIP2AsiRNA组为（3.53±0.32）?滋g/ml，差异有统计学意义（t=8.598，P=0.001）；细胞周期阻滞于G1期，ControlsiRNA组G1期细胞比例为66.860±1.972，CIP2AsiRNA组为74.613±3.357，差异有统计学意义（t=3.449，P=0.026）；S期细胞比例减少，ControlsiRNA组为23.713±1.564，CIP2AsiRNA组为17.747±1.255，差异有统计学意义（t=-5.153，P=0.007）；沉默CIP2A没有引起细胞凋亡率的变化（P=0.216）。Westernblot结果显示，沉默CIP2A表达可下调CyclinD1（t=-4.531，P=0.011）、c-myc（t=-4.522，P=0.011）、p-AKT（t=-4.574，P=0.010）的表达，但对总AKT蛋白的表达没有影响（t=0.051，P=0.962）。结论：沉默CIP2A基因可抑制喉癌Hep-2细胞生长，增加喉癌细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与下调c-myc、p-AKT、cyclinD1的表达有关。