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马铃薯Y病毒复制酶基因不同位置cDNA区段介导对PVY的不同抗性
, PP. 227-233
Keywords: 马铃薯Y病毒 ,复制酶基因 ,RNA介导的病毒抗性
Abstract:
为探究靶序列位置对RNA介导的病毒抗性产生的影响,利用聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)技术扩增马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)复制酶基因(nuclearinclusionb,NIb)不同位置的cDNA区段,反向插入双元载体pROKII中,构建了发夹RNA(hairpinRNA,hpRNA)结构的植物表达载体。将构建的植物表达载体采用冻融法转入农杆菌LBA4404,叶盘法转化烟草NC89,获得转基因植株。攻毒试验表明:PVYNIb基因不同位置cDNA区段介导的对PVY的抗性存在显著差异;3'端1/2处和中间位置的序列可介导高水平的病毒抗性,抗性植株的比例在50％以上,而5'端、5'端1/2处和3'端的序列介导的抗性效率较低,抗性植株的比例仅为10％～30％。Northern杂交显示:抗病植株中RNA的积累量明显低于同类型的感病植株,抗性与RNA积累量呈负相关;抗病转基因植株中有siRNA存在,表明病毒抗性是由RNA介导的。
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