OALib Journal期刊
桑遗传转化体系的建立及槲皮素合成的研究
Keywords: 桑 ,遗传转化 ,毛状根 ,槲皮素 ,HPLC
Abstract:
目的:建立桑的遗传转化体系,并对其毛状根生长特性和次生代谢产物槲皮素含量进行探索。方法:利用卸甲型根癌农杆菌AgrobacteriumtumefaciensC58C1侵染桑的黄化无菌苗,建立毛状根的诱导与培养体系;优化毛状根的扩大培养条件并测定其生长曲线,对桑毛状根T-DNA转化结果进行PCR检测;利用RP-HPLC检测槲皮素的含量。结果:用C58C1侵染无菌苗外植体,侵染10min、分别预培养、共培养2d及添加质量浓度为100mg·L-1的乙酰丁香酮(AS)可得最高转化率;PCR检测结果表明,发根农杆菌Ri质粒的rolB,rolC基因片段已整合入桑的毛状根基因组中;C58C1侵染桑黄化无菌苗茎段10d后,茎段伤口处陆续产生毛状根,30d后幼茎上产生毛状根的外植体达92%;在1/2MS+0.05mg·L-1IBA液体培养基中培养50d后,由HPLC检测结果表明,毛状根中槲皮素含量相比于原植株增加了8.5倍。结论:成功建立桑科毛状根诱导与离体培养体系,为其他木本植物毛状根培养的研究提供了参考,并进一步为槲皮素等药用活性成分的工业化生产奠定了基础。
References
[1] 肖霞,李书渊. 桑的药用历史和功效[J]. 四川蚕业,2007,2: 56. [2] 买买提·依明,特拉津·那斯尔,夏庆友,等. 新疆沙漠桑树营养成份的分析和药用价值的探讨[J]. 北方蚕业,2008,29 (1): 20. [3] 唐忠富. 桑资源的药用开发与利用[J]. 蚕桑通报,2008,39(1): 6. [4] 王艳芳,王新华,朱宇同. 槲皮素药理作用研究进展[J]. 天然产物研究与开发,2003,11(2): 171. [5] Chilton M D, Tepfer D A, Petit A, et al. Agrobacterium tumefaciens inserts T-DNA into the genomes of the host plant root cells[J]. Nature, 1982: 295. [6] Giri A, Lakshmi Narasu M. Transgenic hairy roots: recent trends and applications[J]. Biotechnol Adv, 2000, 18: 1. [7] 王淑芳,孙一铭,雷桅,等. 粘毛黄芩毛状根培养体系的建立及其黄芩苷的动态合成[J]. 中国中药杂志,2008,33(14): 1669. [8] 孙敏,曾建军. 长春花毛状根培养及抗癌生物碱产生的研究[J]. 中国中药杂志,2005,30(10): 741. [9] 孙敏,汤绍虎,杨兰英. 转化毛状根获得萝芙木生物碱的研究[J]. 生物工程学报,1993,9(3): 287. [10] Zhang L, Ding R X, Chai Y.R, et al. Engineering tropane biosynthetic pathway in Hyoacyamus niger hair root cultures[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2004, 101: 6786. [11] 孙莲,严雷,石骁呢,等. RP-HPLC测定桑叶、桑枝和桑花中槲皮素和山奈酚的含量[J]. 药物分析杂志,2005,25(10): 1230. [12] 戴开金,罗奇志,侯连兵. HPLC法测定桑叶中芦丁、绿原酸和槲皮素[J]. 南方医科大学学报,2009,29(3): 579. [13] 王立,姚惠源,陶冠军,等. 乌饭树树叶中槲皮素的提取分离与鉴定[J]. 食品与生物技术学报,2005,24(4):89. [14] Di cola, Costantino P, Spano L. Cell commitent and rolB gene expression in the induction of root differentiation[J]. Plant Cell Tissure Organ Cult, 1996,46: 203. [15] HE Yueqiu. An improved protocol for fungal DNA preparation[J]. Mycosystem, 2000,19(3): 434. [16] 周卫军,唐恒胜,刘文英. RP-HPLC外标法测定黄体酮含量[J]. 中南药学,2005,3(2): 78. [17] Mozo T, Hooykaas P J J. Electroporation of megaplasmids into Agrobacterium[J]. Plant Mol Biol, 1991,16: 971. [18] Hirakura K, Fujimoto Y, Fukai T, et al. Two phenolic glycosides from the root bark of the cultivated mulberry tree(Morus lhov)[J]. J Nat Prod, 1986,49(2): 218. [19] 张敉,陈曼,孙视,等. 桑白皮的化学成分研究(Ⅱ) [J]. 中国中药杂志,2009,34(12): 1601. [20] 陈菁菁,李向荣. 微波萃取法提取桑叶和桑白皮的黄酮类成分[J]. 中药材,2006,29(10): 1090. [21] 杨雪清. 木本曼陀罗毛状根诱导及其植株再生 . 重庆:西南大学,2007.
Full-Text
Contact Us
service@oalib.com
QQ:3279437679
WhatsApp +8615387084133
