全部 标题 作者
关键词 摘要

OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用:99美元

查看量下载量

相关文章

更多...

金荞麦苯丙氨酸解氨酶基因FdPAL的克隆及原核表达

Keywords: 金荞麦,苯丙氨酸解氨酶(PAL),基因克隆,表达

Full-Text   Cite this paper   Add to My Lib

Abstract:

目的:克隆金荞麦苯丙氨酸解氨酶(FdPAL)基因DNA和全长cDNA序列,对该基因进行序列分析,原核表达及其活性相关研究。方法:采用同源克隆和RT-PCR技术扩增苯丙氨酸解氨酶基因的DNA序列和全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析;构建PAL原核表达载体pET30b(+)-FdPAL,在大肠杆菌EscherichcoliBL21(DE3)中进行诱导表达,使用分光光度计法定量测定其酶活,使用薄层色谱法鉴定其催化活性。结果:金荞麦PAL基因DNA序列全长2583bp,由2个外显子,1个内含子构成(命名为FdPAL,GenBank登录号为HM628904);cDNA序列包含1个2169bp的开放阅读框(ORF),编码722个氨基酸,理论相对标准分子质量78.31kDa,等电点5.94。SDS-PAGE分析表明,诱导后的新生蛋白质相对标准分子质量为75.37kDa;诱导4h后,表达产物的苯丙氨酸解氨酶比活力最高,达到4386nmol·g-1·min-1;薄层色谱结果表明,诱导表达产物具有催化苯丙氨酸转化为肉桂酸的活性。结论:首次从金荞麦中克隆到PAL基因,该基因具有植物PAL同源基因的典型特征;重组的金荞麦PAL基因表达载体能有效地在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达,并形成具有一定催化功能的酶。

References

[1]  贾彩凤, 李艾莲. 药用植物金荞麦的光合特性研究[J]. 中国中药杂志,2008, 33(2): 129.
[2]  程友斌. 金荞麦的化学成分及抗炎药理研究. 武汉: 湖北中医学院,2007.
[3]  MacDonald M J, D\'Cunha G B. A modern view of phenylalanine ammonialyase[J]. Biochem Cell Biol,2007, 85: 273.
[4]  Shaw N M, Bolwell G P, and Smith C. Wound-induced phenylalanine ammonia-lyase in potato (Solanum tuberosum) tuber discs. Significance of glycosylation and immunolocalization of enzyme subunits[J]. Biochemistry,1990, 267(5): 163.
[5]  贺立红, 张进标, 宾金华.苯丙氨酸解氨酶的研究进展[J]. 食品科技,2006, 31(7):31.
[6]  Havir E A, Reid P D, Marsh H V, Jr. L-phenylalanine ammonia-lyase (Maize) evidence for a common catalytic site for L-phenylalanine and L-tyrosine[J]. Plant Physiol,1971, 48(2): 130.
[7]  Kyndt J A, Meyer T E, Cusanovich M A, et al. Characterization of a bacterial tyrosine ammonia lyase, a biosynthetic enzyme for the photoactive yellow protein[J]. FEBS Lett,2002, 512(1/3): 240.
[8]  袁其朋, 岳海燕. L-苯丙氨酸生产中PAL酶活及产酸因素的研究[J]. 北京化工大学学报:自然科学版, 2003, 30(5): 1.
[9]  宋柬, 马会勤, 郝佳, 等. 大豆苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中重组表达及活性鉴定[J]. 食品科学,2006, 27(7): 29.
[10]  吴琦, 曾子贤, 邵继荣, 等. 金荞麦内转录间隔区(ITS)的扩增及序列分析[J]. 草业学报,2007, 16(5): 127.
[11]  中国医学科学院药物研究所.薄层层析及其在中草药分析中的应用[M]. 北京: 科学出版社, 1978.
[12]  Bremer B, Bremer K, Heiari N, et al. Phylogenetics of asterids based on 3 coding and 3 non-coding chloroplast DNA markers and the utility of non-coding DNA at higher taxonomic levels[J]. Mol Phylogenet Evol, 2002, 24(2): 274.
[13]  Koukol J, Conn E E. The metabolism of aromatic compounds in higher plants. Ⅳ. Purification and properties of the phenylalanine deaminase of Herdeum vulgare[J]. J Biol Chem,1961, 236(10): 2692.
[14]  程水源, 陈昆松, 刘卫红, 等. 植物苯丙氨酸解氨酶基因的表达调控与研究展望[J]. 果树学报, 2003, 20(5): 351.
[15]  Xu F, Cai R, Cheng S, et al. Molecular cloning, characterization and expression of phenylalanine ammonia-lyase gene from Ginkgo biloba[J]. Afri J Biotechnol, 2008, 7(6): 721.
[16]  李菁, 李逢博, 王炜. 蛋白质序列复杂性简化与非比对序列分析[J]. 生物化学与生物物理进展, 2006, 33(12): 1215.
[17]  Schulz W, Eibcn H G, Hahlbrock K. Expression Escherichia coli of catalytically active phenylalanine ammonia-lyase from parsley[J]. FEBS Lett, 1989, 258(2): 335.
[18]  蔡朱男, 余应年, 罗建红, 等. 水稻苯丙氨酸氨解酶基因在大肠杆菌BL21(DE)3中的表达[J]. 中国病理生理杂志, 2000, 16(1): 12.
[19]  Rosler J, Krekel F, Amrhein N, et al. Maize phenylalanine ammonia-lyase has tyrosine ammonia-lyase activity[J]. Plant Physiol,1997, 113(1): 175.
[20]  Hsieh L S, Yeh C S, Pan H C, et al. Cloning and expression of a phenylalanine ammonia-lyase gene (BoPAL2) from Bambusa oldhamii in Escherichia coli and Pichia pastoris[J]. Protein Express Purif, 2010, 71(2):224.
[21]  Lütcke H A, Chow K C, Mickel F S, et al. Selection of AUG codons differs in plants and animals[J]. EMBO J, 1987, 6(1): 43.
[22]  邵萌, 杨跃辉, 高慧媛, 等. 金荞麦中的酚酸类成分[J]. 中国中药杂志,2005, 30(20): 1591.

Full-Text

Contact Us

service@oalib.com

QQ:3279437679

WhatsApp +8615387084133