%0 Journal Article
%T 金荞麦苯丙氨酸解氨酶基因FdPAL的克隆及原核表达
%A 李成磊
%A 冯争艳
%A 白悦辰
%A 陈惠
%A 赵海霞
%A 吴琦
%J 中国中药杂志
%D 2011
%X 目的:克隆金荞麦苯丙氨酸解氨酶(FdPAL)基因DNA和全长cDNA序列,对该基因进行序列分析,原核表达及其活性相关研究。方法:采用同源克隆和RT-PCR技术扩增苯丙氨酸解氨酶基因的DNA序列和全长cDNA序列并对其进行生物信息学分析;构建PAL原核表达载体pET30b(+)-FdPAL,在大肠杆菌EscherichcoliBL21(DE3)中进行诱导表达,使用分光光度计法定量测定其酶活,使用薄层色谱法鉴定其催化活性。结果:金荞麦PAL基因DNA序列全长2583bp,由2个外显子,1个内含子构成(命名为FdPAL,GenBank登录号为HM628904);cDNA序列包含1个2169bp的开放阅读框(ORF),编码722个氨基酸,理论相对标准分子质量78.31kDa,等电点5.94。SDS-PAGE分析表明,诱导后的新生蛋白质相对标准分子质量为75.37kDa;诱导4h后,表达产物的苯丙氨酸解氨酶比活力最高,达到4386nmol·g-1·min-1;薄层色谱结果表明,诱导表达产物具有催化苯丙氨酸转化为肉桂酸的活性。结论:首次从金荞麦中克隆到PAL基因,该基因具有植物PAL同源基因的典型特征;重组的金荞麦PAL基因表达载体能有效地在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中表达,并形成具有一定催化功能的酶。
%K 金荞麦
%K 苯丙氨酸解氨酶(PAL)
%K 基因克隆
%K 表达
%U http://www.cjcmm.com.cn/cjcmm/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20112305&flag=1