位点特异性PCR方法的建立及对近源种鹿茸药材的鉴别研究

目的：针对正品鹿茸与近源种鹿茸药材饮片鉴别的难点，建立一种简便、快速、准确的近源种鹿茸药材分子鉴别方法。方法：根据鹿科鹿属种动物Cytb全序列比对分析，设计1对能准确鉴别正品鹿茸（包括梅花鹿和马鹿）和其他近源种鹿茸的引物，在此基础上建立鹿茸药材位点特异性PCR鉴别方法，并对影响PCR结果的主要因素退火温度、Taq用量、循环次数以及模板用量和重复性等进行方法学考察和优化。结果：在方法学考察的基础上，在25μLPCR反应体系，退火温度为65℃的条件下，能准确扩增出约323bp大小的阳性DNA条带，经测序验证结果表明，系正品鹿茸原动物的Cytb基因序列片段，而伪品鹿茸未扩增出条带。结论：所建立的位点特异性PCR方法，能将正品鹿茸与其他近源种鹿茸药材鉴别开来，具有较高的特异性、重复性，可广泛应用于鹿类药材的鉴别。