麻疯树核糖体失活蛋白curcin在大肠杆菌中高效表达条件的研究

目的：编码麻疯树毒蛋白(curcin)成熟蛋白的基因原核表达载体的构建及其高效表达条件的研究。方法：根据GenBank上麻疯树的cDNA序列设计引物，用PCR方法从麻疯树基因组中扩增得到编码麻疯树毒蛋白成熟蛋白的基因；将其导入原核表达载体pQE30，pET32中，并将其转入大肠杆菌获得重组菌株。在不同诱导剂、不同温度、不同诱导时间等条件下诱导其产生重组蛋白并进行检测比较。结果：用PCR方法从麻疯树基因组中扩增得到编码麻疯树毒蛋白成熟蛋白的基因，成功构建了原核表达载体pQER，pETR，并获得重组菌株PRM，PRB。在不同诱导剂、不同温度、不同诱导时间等条件诱导下，PRB均无重组蛋白产生，而PRM却能以包涵体的形式表达curcin。结论：重组菌PRM在诱导6h，28℃，IPTG05mmol·L-1时表达curcin蛋白的效率最高。