用抑制性差减杂交构建As2O3诱导的NB4细胞凋亡相关基因文库

目的：构建三氧化二砷（As2O3）诱导的急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞凋亡相关基因文库。方法：用含4μmol？L-1As2O3和正常培养基培养NB4细胞24h，抽提总RNA，经逆转录酶合成双链cDNA，分别以砷诱导凋亡组和对照组作为tester和driver，进行双向抑制性差减杂交（suppress-ionsubtractivehybridization，SSH），筛选As2O3诱导的NB4细胞凋亡相关基因，将差异表达基因进行PCR扩增并与pGEM-Teasy克隆载体连接，转化DH5α大肠杆菌，经蓝白斑筛选获得白色阳性克隆，PCR扩增出未知基因片段。结果：成功构建了分别代表在NB4细胞中表达上调和下调的基因文库。结论：经双向抑制性差减杂交获得了NB4细胞差异表达基因文库，为克隆NB4细胞凋亡相关基因奠定了基础。