UPLC-MS/MS同时测定大承气汤大鼠血浆中9种活性成分的含量

该研究建立了大鼠血浆中大承气汤9种活性成分同时测定的UPLC-MS/MS方法。采用AglientC18色谱柱（2.1mm×50mm，1.7μm）进行色谱分离，利用甲醇-5mmol·L-1甲酸铵流动相进行梯度洗脱，流速0.3mL·min-1。实验过程血浆的前处理不仅考察了甲醇、乙腈等有机溶剂蛋白沉淀法，同时考察了液-液萃取法中不同萃取溶剂、不同涡旋时间、萃取次数及不同体积萃取溶剂等因素对各活性成分回收率的影响。最终确定以布洛芬为内标，采用乙酸乙酯液-液萃取法进行血样前处理，N2吹干复溶，离心后上清液进行UPLC-MS/MS分析，在电喷雾电离（ESI）负离子模式下，采用多重反应监测模式进行检测。大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、厚朴酚、和厚朴酚、橙皮苷及橙皮素的线性范围分别为0.33~660，0.40~792，0.41~827，0.34~680，0.45~907，0.46~927，0.43~867，0.34~683，0.39~787μg·L-1，且线性关系良好；提取回收率均>69.39%；日内和日间的RSD<15%。该方法符合生物样品分析的要求，可用于研究大鼠灌胃大承气汤后，血浆中该9种活性成分的同时测定，为其量-效物质基础提供了理论依据。