罗非鱼无乳链球菌lrrg-sip融合基因原核表达载体的构建及表达

lrrg和表面免疫原性蛋白（sip）是无乳链球菌（streptococcusagalactiae）的2种表面蛋白，具有良好的免疫原性。为获得罗非鱼无乳链球菌表面蛋白lrrg和sip蛋白的融合蛋白，该试验采用基因拼接技术中的双酶切法分2步逐个将sip和lrrg基因插入pcold？ⅱ载体中，构建原核表达载体pcoldⅱ-lrrg-sip。将成功构建的融合基因原核表达载体转化感受态细胞bl21（de3），进行诱导表达条件的优化。结果显示，15℃、iptg0.5mmol？l-1、诱导9h，目的蛋白呈可溶状态的表达量最高。westernblot检测结果显示lrrg-sip融合蛋白大小与预测一致（162kda），说明成功构建了融合基因，为罗非鱼源无乳链球菌亚单位疫苗的研制奠定了基础。