温州蜜柑萎缩病毒小外壳蛋白基因克隆与原核表达及其抗体制备

用rt-pcr方法，从采自重庆奉节的‘宫本’柑橘的2个样品中扩增出温州蜜柑萎缩病毒（satsumadwarfvirus，sdv）sdvrna2的3′末端，长度为975bp，与报道的sdvs-583′末端序列同源性分别为98.7%和98.4%。根据获得的序列设计引物，以含有sdvfj3′末端序列的质粒为模板，pcr扩增获得大小为654bp的sdv-fj小外壳蛋白（smallcoatprotein，cps）基因产物。构建了cps与gst融合表达载体pgex-cps，在37℃、1.0mmol·l-1iptg条件下诱导表达，sds-page电泳分析表明成功表达出分子量约为42kd的gst-cp融合蛋白。以表达的融合蛋白为抗原免疫家兔，制备的抗血清的效价为1/12800。用获得的抗体进行组织印迹分析表明，sdv在柑橘叶柄基部韧皮部维管束区域含量最高。