葡萄4种病毒多重rt-pcr检测体系的建立

以复合感染4种病毒的‘红地球’（redglobe）葡萄样品为试材，对影响多重pcr的dntps浓度、taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化，建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3（grapevineleafroll-associatedvirus-3，glrav-3）、沙地葡萄茎痘相关病毒（grapevinerupestrisstempittingassociatedvirus，grspav）、葡萄病毒b（grapevinevirusb，gvb）和葡萄病毒a（grapevinevirusa，gva）的多重rt-pcr方法。灵敏度测验结果显示，多重rt-pcr与单一rt-pcr检测灵敏度基本一致。多重rt-pcr获得的特异性片段大小分别为905、546、460和196bp，经过克隆、测序及序列比对，表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对7个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果表明，所建立的多重rt-pcr技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。